cDNA第一链合成用25ul体系还是10ul体系好？
这个没什么问题。。看你需要的。。。我做实验是用10ul的
利用逆转录酶和mRNA模版合成cDNA的主要步骤是什么
1、以mRNA为模板，以四种脱氧核苷酸作原料，在逆转录酶作用下，合成DNA单链
2、以DNA单链为模板，以四种脱氧核苷酸作原料，继续合成DNA另一条链，两条DNA链形成cDNA
cDNA合成时要用到Klenow片段吗？
展开全部Klenow片段是DNA-pol I（DNA聚合酶I）的大片段，具有完整的DNA-pol I的5‘到3’聚合活性、3‘到5’的外切活性，无5‘到3’的外切活性，一般是cDNA第二链的合成。cDNA合成主要靠DNA-pol I和反转录酶
从RNA抽提到制成cDNA的全过程
一).构建cDNA文库：以生物细胞的总 mRNA 为模板，用反转录酶合成互补的双链 cDNA ，然后接到载体上，转入到宿主后建立的基因文库就是 cDNA 文库。1、mRNA的提取及其完整性的确定1） 总 RNA 的提取RNA 提取方法：APGC法或NP-40或应用试剂盒提取总RNA2）mRNA的分离高等真核生物 mRNA 分子的 3′ 端均有 poly(A) 尾，将总RNA通过寡聚（DT）纤维柱分离mRNA或利用磁珠法制备纯mRNA。在某些情况下，裂解细胞后用蔗糖梯度来制备mRNA-核糖体复合物作为提取mRNA的替换途径。3） mRNA 的纯化 ①按照大小对总 mRNA 进行分级，主要用琼脂糖凝胶电泳和蔗糖密度梯度离心法进行分级；②多聚核糖体的免疫学纯化法，这是利用抗体来纯化合成目的多肽的方法。4）mRNA 完整性的确定确定 mRNA 完整性的方法有三种：① 直接检测 mRNA 分子的大小
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